【貨號】?BI-WB005

【規格】?200T?/ 250T / 500T/ 2500T / 5000T /B （蛋白標準品（5mg/mL））

【保存】10~30℃保存，12個月。蛋白標準溶液配制后需-20℃保存。

【產品組成】?

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【產品簡介】

BCA蛋白定量是最常用的蛋白濃度檢測方法，其與傳統方法相比，更簡單、更穩定、更靈敏度。BCA法測定蛋白濃度受其他成分影響小，對于5%以內的SDS、TritonX-100、Tween20、Tween80均具有很好的兼容性,但易受螯合劑、高濃度的還原劑等的影響。所以，在BCA法測定蛋白濃度前應使蛋白溶液中的EDTA濃度≤10mM，DTT濃度≤1mM，2-ME≤0.01%。

BCA蛋白定量試劑盒在50~1000μg/mL濃度范圍內有較好的線性關系，其最小檢出量為25μg/mL。本試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

【使用方法】

1、取1mL蛋白標準配制液完全加入到含有20mg的蛋白標準（BSA）中，充分溶解，后配制成20mg/mL的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白標準溶液應-20℃保存。

2、取適量的5mg/mL蛋白標準溶液，稀釋至終濃度為500μg/mL或所需濃度。如取100μL 5mg/mL蛋白標準，加入900μL稀釋液，充分混勻，即配制成500μg/mL蛋白標準溶液。

3、根據樣品數量，按試劑（A）:試劑（B）=50:1的比例配制BCA工作液，即取50份BCA試劑A和1份BCA試劑B，充分混勻，即獲得BCA工作液。例如取5mLBCA試劑A和0.1mL BCA試劑B，配制成5.1mL BCA工作液，BCA工作液室溫24h內穩定。

4、將500μg/mL蛋白標準溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μL加到96孔板或EP管中，加稀釋液補足至20μL，其蛋白標準濃度依次為0、25、50、100、200、300、400、500μg/mL。

5、加20μL待測蛋白到96孔板或EP管中，如果樣本不足20μL，用稀釋液補足至20μL。注意：如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白的溶液不同，應在待測蛋白中加入20μL稀釋液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋室溫白樣本孔中加入20μL稀釋液，以減少不同溶液的差異。

6、各孔或管加入200μL配制好的BCA工作液，37℃孵育20~30min。

7、酶標儀或分光光度計測定562nm波長處吸光度（如無562nm，540~595nm之間的波長也可），各孔或管吸光度減去用未加500μg/mL蛋白標準溶液的吸光度，以求得的差值為縱坐標，以標準孔或管中蛋白濃度（μg/mL）為橫坐標，得出標準曲線及回歸方程，根據標準曲線計算出待測樣品的蛋白濃度。

【注意事項】

1、如果檢測效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會隨著時間的延長不斷加深。顯色反應也會隨溫度升高而加快；如果濃度較低，可以適當延長孵育時間或在較高溫度下孵育。

2、測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質。

3、BCA法檢測中樣本中不應含有EDTA，否則影響檢測結果。

4、因BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，建議每次測定時都做標準曲線，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則每次都做標準曲線。

5、如果沒有酶標儀，也可以使用普通分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。應按比例適當加大BCA工作液的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應按比例放大；使用分光光度計測定蛋白濃度時，可以測定的樣品數量可能會顯著減少。

6、為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當加熱，但是切勿過熱，否則易失效。

7、為保證蛋白的精確定量，樣品的提取和標準蛋白的配制最好選用相同的緩沖液，同時也要保證兩者檢測條件的一致性。如果緩沖液本身就有較高的背景值，建議使用其他的方法測定。

8、試劑（C）:蛋白標準（BSA）宜保存于10~30℃陰涼處，避免暴曬。

9、本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

10、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。