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1、1個96T試劑盒能測多少個樣？

2、標準品500ml（96T/48T），能夠測多少次？

1）單標可以測四次

2）雙標可以測兩次

3、血液樣本如何選擇測ELISA？

1、血漿全血標本經抗凝分離后去除血細胞成分即為血漿，主要化學成分測定和凝血項目檢測等。

2、血清是血液離休凝固后分離出來的液體，血清與血漿相比較，主要是缺乏纖維蛋白原，某些凝血因子也發生了變化。血清主要用于化學和免疫學等檢測。

說明書上一般寫血漿和血清都可以檢測，根據需要選擇，例如：纖維蛋白原檢測用血漿樣本，血清樣本檢測纖維蛋白原殘留。

來源：劉成玉. 臨床檢驗基礎[M]. 2005.P5

4、血液樣本發生溶血是否能檢測？

輕微溶血勉強可以檢測，明顯溶血建議重新取樣，溶血因紅細胞破壞溶解時釋放大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA，會導致非特異性顯色，干擾測定結果。

來源：

http://www.360doc.com/content/18/1207/05/52645714_799883575.shtml

5、組織樣本操作流程：

1） 組織樣本必須保持鮮重，如果是凍存的組織，應該室溫平行2小時以上，然后用生理鹽水沖洗干凈，再用濾紙把周圍的水分吸干，稱重！組織重量不能低于50mg；

2）組織勻漿液選取是PBS（PH=7.2-7.4，濃度為0.01mol/L）勻漿的比例為1:10，相當于1g組織加9ml的勻漿液；

3）組織勻漿后，離心取上清，離心轉數為5000轉，但不能超過5000轉，時間為15分鐘；

4） 實驗中樣本提取的是200mg的樣本加1.8ml的勻漿液。

6、組織樣本操作中的常見問題：

1）問：從各樣品中取了同樣大小的肉塊吧？具體是取了多少？怎么取的？稱重方式嗎？之前好像提到過肉塊大小的尺寸，是不是用其他方式做到了各樣品的起始量的一致？

答：對于組織，不可能確定好每塊組織都達到恒定的重量，這個不太現實。都是按照固定的勻漿比例（勻漿比例為10%），相當于1g組織加9ml的勻漿液，重量小的，勻漿液也會少。最終的濃度是不變的！

2）問：測定樣品時需要將樣品制成液體樣本吧？請問是如何做成液體樣品的？勻漿嗎？如果是勻漿方式的話應該有溶劑的，使用了哪些溶劑呢？

答：勻漿比例在上面已經告訴了，勻漿液采用的是0.01mol的PBS（磷酸鹽緩沖液）PH控制在7.2-7.4。

7、ELISA試劑盒操作細節常見問題整理：

1）問：是不是空白對照就是什么都不加？

答：不加樣本，不加樣本稀釋液，不加酶標試劑，其他都可以加。

2）問：樣本稀釋液是配好的嗎？

答：樣本稀釋液是配好的。

3）問：樣本稀釋液可以用來直接稀釋血清嗎？

答：可以的，直接加40ul就可以了。

4）問：洗滌液是濃縮的；是一次配好，還是現配現用？謝謝。

答：濃縮的，現配現用。

5）問：加入的顯色液A\B分別是什么物質？作用原理？

答：顯色劑A和B，是經典的TMB顯色系統。具體原理可以參考免疫方面的教科書。在這里不詳細列出。

6）問：終止液是什么物質？如何做到終止反應的？

答：終止液是2mol的硫酸溶劑。終止反應也是和原理相關。這個參考教科書！

7）問：稀釋液是什么成分？

答：標準稀釋液是PBS（PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L）。樣本稀釋液是含有0.5%BSA的PBS（PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L）。

8）問：需要避光保存的試劑是哪個？

答：需要避光的是顯色液B。

9）問：試劑盒從冰箱取出后，室溫放置會影響其效果嗎？

答：試劑盒在做實驗前應該要室溫平衡一小時。短時間（3、4小時）沒有任何影響。

10）問：樣品研磨后是立即離心，還是在4度冰箱里提取幾個小時以后再離心？

答：樣本研磨后立即離心即可。

補充：5%BSA 封閉液(Blocking Buffer)適用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫組化實驗中非特異性蛋白結合位點的封閉。

8、樣本保存條件和時間怎么選擇？

9、最后如果樣本數據沒有達到預期效果，不要慌，可以按下面流程排查問題，或者聯系公司技術。