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BIOCHANNEL 培養(yǎng)建議 | 人胚腎細(xì)胞

HEK-293A 人胚腎細(xì)胞

293A細(xì)胞是眾多293細(xì)胞系列的一個(gè)亞克隆,因其具有相對(duì)扁平的形態(tài)和良好的貼壁能力而得名(A是adhesion首字母)。該細(xì)胞含有一個(gè)穩(wěn)定整合的E1基因拷貝,能夠提供生成重組腺病毒所需的E1蛋白(包括E1a和E1b蛋白),故它常被用于腺病毒的初始生產(chǎn)、擴(kuò)增和滴定。在培養(yǎng)過(guò)程中,該細(xì)胞呈現(xiàn)單層的扁平形態(tài),沒(méi)有明顯的細(xì)胞重疊和細(xì)胞空隙(hole),這使得病毒滴定和空斑測(cè)定(plaque assay)更為容易。

293FT 人胚腎細(xì)胞

該細(xì)胞來(lái)源于用 SV40 大T抗原轉(zhuǎn)化的人胚胎腎細(xì)胞 293F(F是 Fast-growth 的首字母),是一種快速生長(zhǎng)、高度可轉(zhuǎn)染的克隆分離株。它是制備 高滴度慢病毒的良好宿主,能夠穩(wěn)定表達(dá) pCMVSPORT6TAg.neo 質(zhì)粒中的 SV40 大T抗原,且大 T 抗原的表達(dá)受到人類(lèi)巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子的控制,表 達(dá)水平較高。此外,該細(xì)胞還可穩(wěn)定表達(dá)新霉素抗性基因,且新霉素抗性基因的 表達(dá)受到 SV40 增強(qiáng)子/啟動(dòng)子的控制,因此可用含有 0.5 mg/ml G418 的培養(yǎng)基 中維持培養(yǎng)。

HEK-293T 人胚腎細(xì)胞

HEK-293T細(xì)胞是293T(293tsA1609neo)細(xì)胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達(dá)SV40抗原,該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),轉(zhuǎn)染效率較高。(轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時(shí)),即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作)

HEK-293 人胚腎細(xì)胞

 

盡管較早的報(bào)道說(shuō)這株細(xì)胞包含腺病毒5 DNA病毒基因組的左端和右端,現(xiàn)在已經(jīng)清楚只存在左端序列。這株細(xì)胞適于滴定人腺病毒。細(xì)胞表達(dá)一種不尋常的由整聯(lián)蛋白beta-1亞基和玻聯(lián)蛋白alpha-v亞基組成的玻聯(lián)蛋白細(xì)胞表面受體。Ad5插入片段進(jìn)行了克隆和測(cè)序,結(jié)果表明堿基1-4344插入到了19號(hào)染色體(19q13.2)

培養(yǎng)建議

細(xì)胞生長(zhǎng)快,通常倍增時(shí)間不到16~24h,每2-3天1:4~1:6傳代,細(xì)胞融合度達(dá)到80%即可傳代。

細(xì)胞貼壁不牢,胰酶消化時(shí)間室溫15~30秒;吹打動(dòng)作盡量輕柔,避免出現(xiàn)過(guò)多氣泡

需要注意的是,血清批間差容易導(dǎo)致293T細(xì)胞的狀態(tài)差異,盡可能選擇穩(wěn)定優(yōu)質(zhì)的同批次血清。為避免運(yùn)輸過(guò)程中震蕩導(dǎo)致293T細(xì)胞漂浮,產(chǎn)品出庫(kù)時(shí)放低了細(xì)胞密度,若收到貨后細(xì)胞密度較低,建議當(dāng)天倒掉灌裝培養(yǎng)基或離心收集細(xì)胞,更換新鮮的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞密度90%以上再傳代。

細(xì)胞傳代處理后的第二天,在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),如死細(xì)胞較多且細(xì)胞密度較低,需要進(jìn)行換液操作,也可視情況穩(wěn)定。

該細(xì)胞貼壁能力較弱,細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密,過(guò)密細(xì)胞容易脫落,脫落下來(lái)的細(xì)胞可以通過(guò)離心收集,繼續(xù)培養(yǎng)。